而对于重度的黄疸、脂血和高IgG样本，若内标无扩增曲线，或者目的基因扩增曲线出现异常，可以使用特征指标正常阴性血清稀释待测样本，从而降低抑制物对检测结果的影响，但同时一定要注意避免因过度稀释导致假阴性结果的发生。

　　2022年5月，第75界世界卫生大会通过了《2022-2030年全球卫生部门关于艾滋病、病毒性肝炎和性传播疾病行动计划》决议[1]，《计划》提出，到2030年消除病毒性肝炎的公共卫生威胁。为了达到这一目标，美国肝炎防治基金会发布了《逐步简化慢性乙肝治疗标准》[2]：只要血清中可以检测到HBV DNA，不管ALT是否升高都干预治疗，这样才能实现WHO提出的80%治疗目标。由此，HBV DNA的检测的灵敏度被成功推上了“风口浪尖”上。

　　当前，HBV DNA定量检测的方法大多是荧光定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术，PCR具有敏感度高，特异度好，定量范围广，可以重复利用等优点[3]。但在临床实践中，影响PCR灵敏度的因素有很多，除了反应体系外，特殊标本的内源性成分也是重要的PCR抑制因素。本研究针对一例高脂血、溶血标本对HBV DNA结果的影响进行处理和分析，从而为本实验室制定可靠的解决方案，现报道如下。

　　患者男性，45岁，既往“慢性乙型肝炎病毒感染病史”，艾米替诺福韦片及恩替卡韦胶囊口服抗病毒治疗，今于我院定期复诊。在为患者进行HBV DNA定量检测时金融理财服务管理，发现标本严重脂血合并溶血（图1），于是我们对标本进行高速离心（2500r/min,15min）处理，处理前后的血清均参与HBV DNA的提取扩增，并检测甘油三酯（TG)金融理财服务管理、血红蛋白（Hb）和总胆红素(TBil）水平。

　　处理前后患者的HBV DNA定量扩增曲线 HBV DNA扩增曲线（蓝色）从左到右为：处理后标本，处理前标本；绿色曲线为内标

　　HBV DNA试剂盒说明书中产品性能指标内源性干扰物质的描述，和处理后患者的TG、Hb和TBil水平如表2。

　　HBV DNA检测结果的准确性将影响临床治疗及预后判断，所以HBV DNA定量检测具有重要的临床意义［6］。检测 HBV-DNA 的方式主要依靠PCR，检测过程包括核酸模板的提取和扩增，很多干扰因素的都会导致结果发生变化，所以HBV DNA定量结果的准确性容易受到样本中抑制物的影响。临床上PCR抑制物主要有: TBil、Hb、IgG、TG和肝素等，这些物质来源于样本的中组分或处理样本过程中所产生，它们会降低模板的扩增效率，金融理财服务管理甚至造成低水平样本检测为假阴性结果，这将会延误治疗，造成病情反复。

　　研究[6]表明，血红蛋白是存在于RBC内PCR抑制物，它们抑制PCR反应可能与释放铁离子有关，从而干扰DNA合成，而胆红素是血红蛋白的衍生物，也会抑制PCR反应。TG抑制PCR反应原因为: ①高血脂会导致荧光猝灭，使得荧光信号强度降低; ②高血脂会抑制Taq酶的活性，从而使扩增效率降低。IgG对PCR反应抑制机制是与单链DNA相互作用，使得靶DNA不能与DNA聚合酶结合，而且当样本加热循环时，这种抑制作用会增强。另有研究表明[7]，高脂血与溶血均会对PCR 检测 HBV-DNA 结果造成影响，建议在实验室检测时，注意做好相关措施，对于高脂血患者先接受降血脂治疗后再进行检测，对于溶血标本则建议再次抽取新鲜血液进行二次检测。蔡桂君[8]等报道利用淋巴细胞分离液分离全血中淋巴细胞提取人类疱疹病毒4型核酸，处理过程为取1ml全血标本加入等量无菌生理盐水稀释，加入2ml淋巴细胞分离液，2500r/min离心15min，小心吸取全部红细胞表面的白色细胞层，将白细胞层直接用于核酸提取。全血标本前处理方法均与全血血浆定量PCR检测结果对比，发现处理后明显高于未处理标本结果，且两种前处理过程中均能有效消除胆红素与血红素对定量PCR的影响。

　　本案例中，样本同时存在脂血和溶血，而且TG的浓度为8.53mmol/L，超出了产品性能指标的浓度值5.668.53mmol/L；Hb和TBil在产品性能指标范围内。标本处理前后的检测结果偏倚为27.61%，远远超出了±0.24的范围。因此我们认为，该样本的脂血状态，抑制了PCR反应，导致检测结果的减低，通过高速离心，可以在一定程度上减轻抑制物的干扰。

　　2018《医学实验室质量和能力认可准则在分子诊断领域的应用说明》文件中的判断标准，对 HBV DNA定量检测试剂干扰进行评价，金融理财服务管理制订出适合本实验室的标准检测程序。对于重度的溶血样本，可以根据内标有无扩增曲线决定是否重抽样本；对于脂血的样本，可以通过高速离心进行检测；而对于重度的黄疸、脂血和高IgG样本，若内标无扩增曲线，或者目的基因扩增曲线出现异常，可以使用特征指标正常阴性血清稀释待测样本，从而降低抑制物对检测结果的影响，但同时一定要注意避免因过度稀释导致假阴性结果的发生。

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